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技術知識

色譜柱清洗的基本原則和使用注意事項

發布時間: 2021-12-09 21:46   648 次瀏覽
及時使用強流動相清洗色譜柱,特別是使用等度分析方法或者洗脫強度比較低的分析方法時,很容易積累強保留的化合物。
a.對于反相模式(如使用C18柱):
1).用高比例水相(如80%)沖洗色譜柱5-10個柱體積,以去除管路和色譜柱中的緩沖鹽(如果體系沒有使用緩沖鹽可以省略這一步);
2).用高比例有機相(如80-90甲醇/乙腈等)沖洗色譜柱10-20個柱體積,必要的時候,可以使用更強的溶劑(如異丙醇或者含少量THF的異丙醇)清洗,再用推薦保存的流動相沖洗后保存。

b. 對于HILIC模式(如使用Diol柱):
1).用高比例水相(如50%的水,部分HILIC柱有水相比例的******限度,需要仔細閱讀官方說明書)沖洗色譜柱10-20個柱體積,以去除管路和色譜柱中的緩沖鹽,并清洗色譜柱;
2) .按照推薦保存的流動相沖洗后保存。

Comix系列混合模式色譜柱:
對于含有強堿性基團的固定相,如:



必須需要在弱酸性條件下使用和保存,因為強堿性基團會在硅膠表面形成強堿性環境而破壞硅膠基質。
對于含有酸性基團的固定相,如:


不可使用甲醇作為有機相,因為酸性基團與甲醇發生酯化反應而被改性(稀釋劑中的少量甲醇影響可以忽略),特別要注意避免管路殘留的甲醇被沖洗進色譜柱。
氨基柱:
1. 水相高的時候易發生固定相(氨丙基)水解而發生柱流失;
2. 氨基身會電離而產生強堿性環境而腐蝕硅膠,因此在弱酸性條件下穩定性更好;
3. 易與醛類化合物(如還原性糖:葡萄糖等) 、芳香羰基化合物發生席夫堿反應,而死吸附化合物并改性色譜柱,影響重現性:
4. 盡量保存在純有機相中,以避免發生水解反應和自身電離產生強堿性條件而腐蝕硅膠。

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